基质胶实验应用-血管生成，手把手教你学会

2025-12-30

基质胶（Matrigel）是模拟体内细胞外基质（ECM）的常用三维培养基质，被广泛用于体外血管生成模型的构建，核心原理是其富含血管生成相关的关键成分（如层粘连蛋白、IV 型胶原、纤连蛋白、生长因子等），能为内皮细胞提供增殖、迁移和管状结构形成的微环境，还原体内血管新生的核心过程。

基质胶血管生成实验是体外评价血管内皮细胞血管形成能力的经典模型，广泛应用于肿瘤血管生成、血管生物学机制及抗血管生成药物筛选等研究。当基质胶在室温下凝固后，会形成类似体内基底膜的三维凝胶结构，为血管内皮细胞（如人脐静脉内皮细胞 HUVEC）提供黏附、迁移和管状结构形成的支撑环境。内皮细胞在基质胶上会经历黏附→迁移→增殖→管状结构分化的过程，最终形成相互连接的血管样网络。

血管生成实验操作步骤

1 基质胶的准备

1）实验前一天，取出基质胶置于碎冰盒中，碎冰盒放入4℃冰箱使其过夜融化；
2）实验前需保证基质胶始终放置在冰盒中，同时对所使用的耗材进行预冷处理；
3）打开血管生成载玻片灭菌包装，取出载玻片；
4）向每孔内加入10 μL基质胶，注意加入基质胶时枪头要垂直于内孔的正上方，防止有基质胶流经上孔而留下残胶；

2 凝胶
1）盖上载玻片的盖子，准备一个10 cm的培养皿，放入浸过水额纸巾，制成一个湿盒
2）将载玻片放入培养皿中，盖上培养皿盖；

3）将整个培养皿放入CO2培养箱中，静置30 min左右等待胶凝结，同时准备细胞悬液；

3 细胞铺板
1）将消化后的细胞制备成密度2×105 cells/mL细胞悬液，充分混匀；
2）将含有已经凝固成胶状的血管载玻片取出；
3）每孔加入50 μL的细胞悬液，注意保持枪头垂直在上孔的上方，不要接触下孔的凝胶；
4）加入细胞培养基，盖上盖，静置，一段时间后，所有细胞都会沉下去落在基质胶的表面；

4 图像采集
按照细胞生长速度定时观察拍照、留存图像。

5 免疫荧光染色（选做）
1)小心移除孔内培养基，切勿触碰胶或者细胞网络。用无血清培养基稀释钙黄绿素使其终浓度为6~8 μg/mL；
2)加入细胞染液使其完全浸没细胞，室温，避光孵育30~40 min；
3)PBS清洗三次，注意PBS要缓缓加入上孔，以免冲击掉细胞；
4)使用Ex=485 nm，Em=529 nm波长进行荧光观察。

6 结果统计
对其成管长度、覆盖面积、成环数、结点数进行测量和记录，并进行统计分析。